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Metodiche
- Analisi dell'instabilità genomica mediante la misura del DNA index con metodi di
citometria a flusso multiparametrica in campioni bioptici ottenuti da lesioni predisponenti e
preneoplastiche dei tumori dell'apparato digerente e del cavo orale
- Analisi delle mutazioni dei geni KRAS2 e APC mediante PCR e sequenziamento in adenomi ed
adenocarcinomi colorettali umani
- Analisi del fenotipo MSI negli adenocarcinomi colorettali umani sporadici
- Analisi dell'espressione genica con metodiche convenzionali e DNA microarrays per
trattamenti in vitro con farmaci tradizionali e biologici mediante l'uso di linee cellulari tumorali
colorettali e del cavo orale transfettate con diversi costrutti di KRAS2 e APC
- Analisi di eventi precoci (variazione del potenziale di membrana mitocondriale) e
tardivi (frammentazione del DNA) dell'apoptosi mediante metodi flussocitometrici (TMRM, JC-1, TUNEL)
- Analisi dell'espressione di proteine associate al ciclo cellulare e all'apoptosi
attraverso metodi flussocitometrici e Western Blotting
- Analisi della cinetica del ciclo cellulare con metodi flussocitometrici associati
all'incorporazione di bromodesossiuridina
- Sorting di popolazioni di nuclei DNA diploidi e aneuploidi ottenute da campioni bioptici o prelievi
secondo la tecnica dello "strato sottile" di regioni del cavo orale definite quali leucoplachie
- Estrazione di DNA da nuclei sortati e non sortati, colorati con DAPI anche a partire da
popolazioni di 20-100.000 nuclei
- Amplificazione del DNA genomico umano intero a partire da poche decine di nanogrammi,
per successive analisi molecolari
- Analisi di aberrazioni cromosomiche numeriche e strutturali mediante tecniche di
citogenetica molecolare (FISH e CGH)
Attrezzature
- Citometro a flusso di ultima generazione, dotato di tre laser e una
lampada UV per l'acquisizione di 10 parametri ottici
- Cell sorter (FACS). Sorter di nuova generazione costituito da Citometro a flusso,
dotato di un diodo UV, collegato ad una unità sortante PPCS che si avvale di un sistema
piezoeletrico per la separazione fisica delle particelle senza creazione di aerosol potenzialmente
pericolosi
- Microscopio a fluorescenza
- Microscopio ottico a luce bianca
- Termociclatore
- Altre dotazioni per analisi di mutazioni
- Sistemi per elettroforesi orizzontali e verticali
- Incubatore a CO2
- Centrifuga refrigerata
- Centrifuga da banco
- Cappa biohazard
- Cappa chimica
- Congelatori (-20°C e -80°C) e frigoriferi da laboratorio
- Contenitore azoto liquido
- Bagno sonicatore a ultrasuoni
- Stufa da laboratorio
- Bagni termostatici
- Bilancia analitica
- Bilancia tecnica
- Oscilloscopio
- Autoclave da banco
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Presentazione della struttura