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Metodiche
- Messa a punto protocolli diagnostici di citofluorimetria per le malattie
linfoproliferative: sono stati disegnati pannelli composti da combinazioni
di anticorpi monoclonali ad hoc per i vari quesiti diagnostici e per i
vari tipi di campione biologico da analizzare. Sono state messe a punto
procedure di acquisizione che possono essere definite "paziente
specifiche" che permettono di studiare al citofluorimetro la malattia
minima residua nelle leucemie linfoblastiche B e T arrivando ad
individuare cellule leucemiche residue con sensibilità vicine a quelle
molecolari.
- Analisi molecolari per le malattie linfoproliferative: si utilizzano
tecniche di PCR qualitatitativa, Real Time PCR, sequenziamento
nucleotidico di segmenti genici amplificati. Queste tecniche nate dalla
ricerca sono state da noi adattate per un uso routinario e perché possano
fornire informazioni diagnostiche/cliniche. Con queste tecniche infatti si
effettuano i seguenti studi: clonalità linfocitaria B, clonalità
linfocitaria T alfa/beta e gamma/delta, presenza di traslocazione degli
oncogeni bcl2 e Bcl1. Inoltre si sono messi a punto tests per lo studio
dei fattori prognostici biologici della leucemia linfatica cronica:
espressione di CD38, Zap-70 intracitoplasmatica e della presenza di
mutazioni somatiche a carico dei geni VH delle Ig. Infine sono stati messi a punto protocolli di
sequenziamento genico per la identificazione di mutazioni a carico dei geni K-RAS, EGFR, BRAF.
- Protocolli di separazioni cellulari a più steps che prevedono l'utilizzo
di gradienti di densità, di colonne magnetiche con anticorpi monoclonali
e/o del cell sorting. Con queste metodiche si ottengono sottopopolazioni
linfocitarie purificate che vengono successivamente studiate a scopo di
ricerca o per quesiti diagnostici.
Attrezzature
- 3 termociclatori
- citofluorimetro
- spettrofotometro
- sistemi elettroforetici per acidi nucleici (apparecchiature per gel di agarosio e di
acrilamide, apparecchiature per transfer da membrana, Western)
- sistema con software dedicato all'analisi delle sequenze nucleotidiche
- microcentrifughe da banco
- sterilizzatore a U.V. da banco
- gel dryer
- cappa sterile a flusso laminare verticale
- incubatore per colture cellulari
- congelatore verticale a -80°C
- centrifughe, frighi, freezer -20°C
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Presentazione della struttura